Assay data
| Assay name | Erythrocyte method （Intracellular reactive oxygen species scavenging activity） |
| Target | その他 |
| Level of test | Cell-based |
| Protocol | マウス心臓から採血し、赤血球を単離し、採取血液量の2.5倍容量に0.5%glucose含有生理食塩水で希釈した赤血球を使用した。単離赤血球0.5mLとオートクレーブで滅菌し55℃程度に冷やした2%gluose含有Krebs-10mM リン酸緩衝液(pH7.4)寒天培地6mLを9cm浅型滅菌シャーレに流し入れ、均一に混和し、固化した。(+)-catechinを標準物質(30～1 mM)として、被検物質は30、10、3、1 mg/mLに生理食塩水に溶解し、それらの40μLを寒天培地上の8mm厚手ペーパーディスクに滴下した。厚手のペーパーディスクと2mm離して置いた6mm薄手ペーパーディスクには5μLのglucose oxidase (GOD)生理食塩水溶液(30、100、300 U/mL)を滴下した。シャーレにアルゴンガスを充填して、37℃で一晩培養した。赤血球寒天培地上のGODディスクの周囲に出来た溶血円半径を測定した。この時、被検薬ディスク側と反対側の溶血円の半径をcontrol、被検薬ディスク側の溶血円半径をtestとした。被検薬ディスクに生理食塩水を入れた時の被検薬側の溶血円半径(実際には溶血距離で、濾紙の半径3mmを除した数値)を100%とし、testの溶血円の縮小割合から抑制率を求めた。この抑制率が50%となる時の濃度IC50を求めるとともに、被検薬1gが(+)-catechinの何mgに相当するかも求めた。 Washed mouse fresh erythrocytes were suspended with glucose-containing Krebs-phosphate-buffered agar medium plate. Glucose oxidase (GOD)-containing filter paper disc and reactive oxygen scavenger or saline containing disc were placed on the agar plate at a distance of 2 mm. After the overnight incubation at 37℃ under low-oxyen condition (argon gas replacement), GOD induced the dose-dependent hemolytic circles. Scavengers inhibited the hemolysis, so % inhibition was calculated by the degree of shrinking compared with saline, and IC50 was also obtained. |
| Result type | |
| Pubmed ID | |
| Memo | Yutaka Matsuoka, Ikuko Mori, Reiko Oguma, Ikue Mizumura and Kanako Wakayama: A simple screening method of bioactive substances for protecting nerves from active oxygen related injury, J. Pharmacol. Sci., 94(Suppl.Ⅰ), 102P (2004) |
| Assay Result Info | No type |